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谈谈药敏试验检测试剂盒使用(MIC测定)操作方法!

2021-06-23

  一、范围

  本方法规定了动物源细菌(大肠杆菌、沙门氏菌、肠球菌、金黄色葡萄球菌、副猪嗜血杆菌、魏氏梭菌和伪结核棒状杆菌)药敏检测试剂盒的操作方法。

  二、材料

  除微生物实验室常规灭菌设备外,其他设备和材料如下:

  2.1 恒温培养箱35±2℃

  2.2 生物安全柜

  2.3 浊度计或者标准比浊管

  2.3 微量加样器1uL~1000uL

  2.4 吸头(与微量加样器匹配)

检测试剂

  三、操作步骤

  取出试剂盒,打开包装待用。

  菌液制备

  将无菌棉签用生理盐水润湿后,直接取过夜培养皿上数个新鲜菌落,与适量无菌生理盐水混匀。然后,用标准比浊管或者浊度计校正菌液浓度至0.5麦氏单位(1~2×108CFU/mL)。用试剂盒中的肉汤按照使用说明书要求的倍数稀释,混匀备用。

  菌液接种

  除空白对照外,其余的95孔加入制备好(用前要混匀)的菌液100?L

  空白对照孔中加入100?L无菌肉汤。盖好板盖并记录菌号。

  孵育

  将检测板置于35℃±2℃很稳培养箱中孵育16~18小时。

  观察结果

  在衬有黑底板的光线下,用肉眼观察。

  先观察阴性对照孔和阳性对照孔:阴性对照孔应无细菌生长,孔内液体未见浑浊;阳性对照孔内应有细菌生长所形成的圆形或者网状沉淀。

  如果阴性和阳性对照结果正常,继续观察其余孔内细菌生长情况,在无细菌生长的孔内所含低抗菌药物浓度即为低抑菌浓度(MIC)。

  四、结果记录

  将MIC结果记录在敏感性检测结果统计表中。

  敏感性检测结果统计表

  (1)G-菌(大肠杆菌、沙门氏菌和副猪嗜血杆菌)MIC

  注:直接填写检测的MIC数值。

  (2)G+菌(肠球菌、金黄色葡萄球菌和伪结核棒状杆菌)MIC

  注:直接填写检测的MIC数值。

  (3)弯曲杆菌MIC

  注:直接填写检测的MIC数值。

  (4)肠球菌和魏氏梭菌MIC(促生长抗菌药物监测)

  注:直接填写检测的MIC数值。


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