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检测试剂盒的双抗夹心的实验方法

2022-03-30

双抗体夹心法是试剂盒中检测抗原的常用方法:

1.将特异性抗体与固体载体连接形成固体抗体:洗涤除去未结合的抗体和杂质。

2.加入被检标本:使其与固相抗体接触反应一段时间,使标本中的抗原与固相载体上的抗体结合,形成固相抗原复合物。去除其他未结合的物质。

第三步,加入酶标抗体:将固相免疫复合物上的抗原与酶标抗体结合。完全清洗未结合的酶标抗体。此时,固体载体上酶的量与样品中检测物质的量正相关。

4.添加底物:夹心化合物中的酶催化底物成为有色产物。根据显色反应的程度,可以定性或定量测定抗原。

在临床检测中,该方法适用于检测蛋白质等各种大分子抗原,如HBsAg、HBeAg、AFP、hCG等。只要获得针对被测抗原的外源抗体,就可以用来包被固相载体,制备酶偶联物,建立这种方法。例如,抗体的来源是抗血清,用于包被和酶标记的抗体取自不同物种的动物。例如,在使用单克隆抗体时,一般选择针对抗原上不同决定簇的两种单克隆抗体,分别用于包被固相载体和制备酶偶联物。这种双位点夹心法具有较高的特异性,通过将被测标本与酶标抗体一起保温,可用于一步检测。

双抗体夹心法检测抗原的另一个注意点是类风湿因子(RF)的干扰。RF是一种自身抗体,主要为IgM型,可与各种动物IgG的Fc片段结合。如果用于双抗体夹心检测的血清样本中含有RF,可作为抗原成分,同时与固相抗体和酶标抗体结合,出现假阳性反应。f(ab’)或Fab片段用作酶结合物的试剂,由于去除了Fc片段,可以消除RF干扰。

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