使用试剂盒前，充分混合所有试剂。不要使液体产生大量气泡，以免加样时加入大量气泡，造成加样误差。
根据待测样品的数量加上标准的数量，确定所需的板数。建议对每个标准孔和空白孔重新钻孔。每个样本根据自己的数量来定，能重新打孔的尽量重新打孔。用样本稀释液1: 1稀释样本，并向反应孔中加入50微升。
向反应孔中加入50微升稀释的标准品，并向反应孔中加入50微升待测样品。立即加入50ul生物素标记的抗体。盖上膜板，轻轻摇匀，37孵育1小时。
从孔中取出液体，用洗涤液填充每个孔，摇动30秒，取出洗涤液，用吸水纸拍干。重复此操作3次。如果用洗板机洗涤，洗涤次数会增加一次。
向每个孔中加入80ul亲和链霉亲和素-HRP，轻轻摇匀，37孵育30分钟。
利用试剂盒的定性夹心免疫分析技术，用合成的HEV多肽抗原包被微孔板。这些多肽是中国HEV株核心氨基酸序列中的高抗原性多肽，分别来自该株的开放阅读框2和开放阅读框3。将样品或标准品添加到孔中并孵育。如果里面有HEV IgM抗体，这些抗体会和HEV多肽抗原结合，固定在上面。清洗板以去除样品中的其他非特异性抗体和其他成分。只有含有HEV IgM抗体与酶结合物的复合物的孔才会变色，加入硫酸溶液使酶与底物的反应停止。
