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ATCC菌株怎样才能算的上是优良的

2023-04-21

  一种良好的ATCC菌株有许多要求:


  产量高,产量高,直接降低固定投资和单一生产成本。


  产品质量符合要求。影响药效和安全性的产品质量。


  稳定性。在生产传代过程中,产量和质量不应有较大变化。一般认为60-90PDL产量的变化不超过30%是可以接受的。


  与生产过程相容。细胞株需适用于大规模生产和放大。


  5.合规性。在构建ATCC细胞株的过程中,应避免接触或使用可能影响安全性的动物源成分或其他成分,以确保单克隆。(clonality)以及整个过程的完整实验记录。


  无菌操作ATCC细胞株注意事项?


  操作前要洗手,进入超净台后要用75%酒精或0.2%新洁尔灭擦试。试剂等瓶口也要擦一下。


  2.点燃酒精灯,在火焰附近操作。耐热物品应经常在火焰上燃烧。金属器械不宜燃烧太久,以免退火,冷却后夹住组织。吸收营养液的器具不能再燃烧,以免燃烧形成碳膜。


  操作动作要准确、敏捷,但不能太快,以免空气流动,增加污染机会。


  不能用手触摸已经消毒器皿的工作部分,工作台上的物品要布局合理。


  开瓶后要尽量保持45℃的斜位。


  吸液的吸管等不能混合使用。


  细胞处理ATCC菌株:


  1)复苏细胞:在37℃水浴中快速摇晃解冻含有1毫升细胞悬液的冷冻管,加入4毫升培养基,混合均匀。离心4分钟,1000RPM条件下放弃上清液,加入1-2毫升培养基,吹匀。然后在培养瓶中加入所有细胞悬液进行一夜培养(或在10厘米皿中加入细胞悬液,加入约8毫升培养基,培养一夜)。第二天更换液体,检查细胞密度。


  细胞传代:如果细胞密度达到80%-90%,就可以进行传代培养。


  对悬浮细胞而言,传代可以参考下列方法:


  方法一:收集细胞,在1000RPM条件下离心4分钟,抛弃上清液,加入1-2mL培养液后吹匀,按1-2mL细胞悬液:2到1:5的比例分为新的含有8ml培养基的新皿或瓶子。


  方法二:可以选择半数换液的方法,抛弃半数培养基后,将剩余细胞悬挂起来,将细胞悬液按1。:2到1:3的比例分为新的含有8ml培养基的新皿或瓶子。


  3)ATCC细胞株的细胞冻结:当细胞生长良好时,可以冻结细胞。悬浮细胞冻结时,应收集细胞,在1000RPM条件下离心5分钟,少量保存上清液(防止细胞吸收),加入一些新鲜培养基,加入冷冻管,在冷冻管中加入10%DMSO,然后冷冻。


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