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保存ATCC菌株的基本方法你还不知道吗?

2023-10-06

  ATCC菌株是从事微生物学和生命科学研究的基本材料。在医学领域,诊断产品的制备、幼苗的生产和微生物致病性的研究。将含有1滴细胞悬浮液的管子放入含有氢氧化钾或五氧化二磷吸水剂的大型试管中,用真空泵泵至1.3帕时密封保存大型试管。这是一种干燥的保存方法,可以降低细胞死亡率,缓慢脱水,适用于各种细菌和真菌。


  无菌安瓿瓶每0.1~0.2毫升注入细胞悬浮液,在-40℃预冻1小时,然后在-20~30℃真空度为13.3帕的情况下脱水。脱水后,安瓿瓶外温度可逐渐升至25℃。脱水后,样品的含水量应低于3%。之后,将安瓿瓶保持1.3帕的真空度,用火焰溶解,保存10℃。为了防止ATCC菌株细胞在冻结脱水过程中受损或死亡,应使用保护剂制备细胞悬浮液。保护剂包括脱脂牛奶、血清、10%蔗糖或葡萄糖溶液等。然而,这种方法的功能是通过核细胞。


  使用甘油或二甲亚(DMSO)将细胞悬浮液作为保护剂制备,放入无菌安瓿中,每管0.2毫升,预冻至-40℃,控制温度下降率为1℃/分钟,然后将ATCC菌株立即放入液氮生物储罐中保存气相(-150℃)。恢复培养时,直接放入38℃的水浴中解冻5~10分钟,然后种植在适当的培养基中。这是根据所有生化反应停止在-130℃以下,微生物无法进行代谢活动而设计的冷冻方法。为了避免冷冻、冻伤和细胞中形成大量冰晶,使用保护剂制备快速溶解的微生物,但在控制预冷冻时使用。


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